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技術(shù)文章

克隆化顯微鏡操作方法
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克隆法顯微鏡操作方法
 　　在直徑6cm培養(yǎng)皿中，加入1ml1.0×108細(xì)胞懸液放置5%CO2飽和濕度，37℃溫箱中放置30min以上，倒置顯微鏡下，尋找那些與周圍相距甚遠(yuǎn)的單個細(xì)胞，將毛細(xì)管口（一頭有直角彎頭毛細(xì)管，一頭連接一尺長乳膠管，用口控制液體進(jìn)入）水平置放于液面上，左右微動，直到看見管口，對準(zhǔn)細(xì)胞，吸入毛細(xì)管，將管中細(xì)胞移到預(yù)先加有2.0×104~5.0×104飼養(yǎng)細(xì)胞96孔板內(nèi)，培養(yǎng)后，即可獲得單個細(xì)胞形成的克隆。
克隆法熒光激活分離法
　　用一種熒光激活細(xì)胞分類器（FluoresceinActivafedCellSorter，F(xiàn)ACS）。其基本原理是：將細(xì)胞經(jīng)熒光抗體染色后，經(jīng)噴嘴形成單個細(xì)胞的線形液滴，在萊塞光激發(fā)下，熒光素發(fā)射熒光，此信號由光電倍增管接收，再結(jié)合細(xì)胞形態(tài)大小產(chǎn)生光散射信號，經(jīng)電腦處理，產(chǎn)生信號并與預(yù)定的信號對比，根據(jù)細(xì)胞熒光強度及細(xì)胞大小不同，將細(xì)胞分成不同級別，在電場中發(fā)生偏離，而分別收集于不同容器中。